PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Freitas Filho E.G., Ferreira M.R.A., Pinto J.F.N., Conceição F.R. & Moreira C.N. 2014. Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 from healthy dairy cattle in Mid-West Brazil: occurrence and molecular characterization. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(1):24-28. Departamento de Medicina Veterinária, Centro de Ciências Agrárias e Biológicas, Universidade Federal de Goiás, Rodovia BR-364 Km 192 n° 3.800, Pq. Industrial, Jataí, GO 75801-615, Brazil. E-mail: cissanm@yahoo.com.br Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) serotype O157:H7 represents the major Shiga toxin-producing E. coli (STEC) strain related to large outbreaks and severe diseases such as hemorrhagic colitis (HC) and the potentially lethal hemolytic uremic syndrome (HUS). The aim of this study was to report the occurrence and molecular characterization of O157:H7 isolates obtained by rectal swab from 52 healthy dairy cattle belonging to 21 farms in Mid-West of Brazil. Detection of 16SrRNA, stx1, stx2, rfbO157, fliCh7, eae, ehxA, saa, cnf1, chuA, yjaA and TSPE4.C2 genes was performed by PCR. The isolates were further characterized by serotyping. Two hundred and sixty E. coli isolates were obtained, of which 126 were characterized as STEC. Two isolates from the same cow were identified as serotype O157:H7. Both isolates presented the stx2, eae, ehxA, saa and cnf1 virulence factor genes and the chuA gene in the phylogenetic classification (virulent group D), suggesting that they were clones. The prevalence of O157:H7 was found to be 1.92% (1/52 animals), demonstrating that healthy dairy cattle from farms in the Mid-West of Brazil are an important reservoir for highly pathogenic E. coli O157:H7.

• Shiga toxin Escherichia coli colitis hemolytic uremic syndrome toxina Shiga colite hemorrágica síndrome hemolítica urêmica

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Freitas Filho E.G., Ferreira M.R.A., Pinto J.F.N., Conceição F.R. & Moreira C.N. 2014. Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 from healthy dairy cattle in Mid-West Brazil: occurrence and molecular characterization. [Escherichia coli enterohemorrágica O157: H7 em bovinos leiteiros saudáveis no Centro-Oeste do Brasil: ocorrência e caracterização molecular.] Pesquisa Veterinária Brasileira 34(1):24-28. Departamento de Medicina Veterinária, Centro de Ciências Agrárias e Biológicas, Universidade Federal de Goiás, Rodovia BR-364 Km 192 n° 3.800, Pq. Industrial, Jataí, GO 75801-615, Brazil. E-mail: cissanm@yahoo.com.br Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC) sorotipo O157:H7 representa as principais cepas de E. coli produtoras de toxina Shiga (STEC) relatadas em grandes surtos e doenças graves, tais como colite hemorrágica (CH) e síndrome hemolítica urêmica (SHU), potencialmente letais. O objetivo deste estudo foi reportar a ocorrência e caracterização molecular de STEC 0157:H7 isoladas por swab retal de 52 bovinos saudáveis pertencentes a 21 rebanhos leiteiros do Centro-Oeste do Brasil. A detecção dos genes 16SrRNA, stx1, stx2, rfbO157, fliCh7, eae, ehxA, saa, cnf1, chuA, yjaA e TSPE4.C2 foi realizada por PCR. Os isolados foram ainda caracterizados por sorotipagem. Dos 260 isolados de E. coli obtidos, 126 foram caracterizados como STEC. Dois deles, oriundos do mesmo animal, foram caracterizados como pertencentes ao sorotipo O157:H7. Ambos apresentaram os genes de virulência stx2, eae, ehxA, saa e cnf1 e na caracterização filogenética, o gene chuA (grupo patogênico D), sugerindo que eles foram clones. A prevalência de O157:H7 foi de 1,92% (1/52 animais), demonstrando que os bovinos leiteiros saudáveis de fazendas do Centro-Oeste do Brasil são importantes reservatórios de E. coli O157:H7 altamente patogênicas.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Silva F.J., Santos C.E.P., Silva G.C.P., Santos R.F., Curci V.C.M. & Mathias L.A. 2014. The importance of Leptospira interrogans serovars Icterohaemorrhagiae and Canicola in coastal zone and in southern fields of Rio Grande do Sul, Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(1):34-38. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Reprodução Animal, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias de Jaboticabal, Universidade Estadual Paulista, Via de Acesso Professor Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14884-900, Brazil. E-mail: fjsepi@gmail.com This study aimed to describe the occurrence of Leptospira interrogans serovars Icterohaemorrhagiae and Canicola, in coastal zone and in southern grasslands of Rio Grande do Sul, Brazil. In each one of the four analyzed farms blood samples were collected from free-living wild animals, domestic animals and humans to perform serological testing for leptospirosis. The presence of antibodies was verified by microscopic agglutination test (MAT). The criterion adopted to consider a serum as agglutination reactant was at least 50% of leptospira for a microscopic field of 100x. From 17 blood samples collected at Chuí, five (29.41%) were positive, three (60.00%) for serovar Icterohaemorrhagiae and two (40.00%) for Canicola. From 21 samples collected in the County of Santana da Boa Vista, six (28.57%) were positive, four (66.67%) for serovar Canicola and two (33.33%) for serovar Icterohaemorrhagiae. From 32 samples collected at Alegrete, 10 (31.25%) were positive, seven (70.00%) for serovar Icterohaemorrhagiae and three (30.00%) foro serovar Canicola. From 17 blood samples collected in Cruz Alta, three (17.64%) were positive, two (66.67%) for serovar Icterohaemorrhagiae and one (33.33%) for Canicola. It is necessary to improve sanitary practices on farms in the state of Rio Grande do Sul, in order to achieve success in leptospirosis control programs.

• Leptospirosis Leptospira interrogans leptospirose

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Silva F.J., Santos C.E.P., Silva G.C.P., Santos R.F., Curci V.C.M. & Mathias L.A. 2014. The importance of Leptospira interrogans serovars Icterohaemorrhagiae and Canicola in coastal zone and in southern fields of Rio Grande do Sul, Brazil. [A importância de Leptospira interrogans sorovariedades Icterohaemorrhagiae e Canicola na zona litorânea e nos campos sulinos do Rio Grande do Sul.] Pesquisa Veterinária Brasileira 34(1):34-38. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Reprodução Animal, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias de Jaboticabal, Universidade Estadual Paulista, Via de Acesso Professor Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14884-900, Brazil. E-mail: fjsepi@gmail.com O presente estudo teve como objetivo descrever a ocorrência de Leptospira interrogans sorovariedades Icterohaemorrhagiae e Canicola, na zona litorânea e nos campos sulinos do Estado do Rio Grande do Sul. Em cada uma das quatro propriedades foram realizadas colheitas de sangue de animais selvagens de vida livre, de animais domésticos e de seres humanos para realização de sorologia para leptospirose. A presença de anticorpos foi verificada pela técnica de Soroaglutinação Microscópica (SAM). O critério adotado para considerar um soro como reagente foi aglutinação de pelo menos 50% das leptospiras no campo microscópico no aumento de 100x. Das 17 amostras de sangue colhidas na propriedade pertencente ao Município de Chuí, cinco (29,41%) foram positivas, três (60,00%) à sorovariedade Icterohaemorrhagiae e duas (40,00%) à Canicola. Das 21 amostras colhidas em Santana da Boa Vista, seis (28,57%) foram positivas, quatro (66,67%) à Canicola e duas (33,33%) à Icterohaemorrhagiae. Das 32 amostras colhidas em Alegrete, 10 (31,25%) foram positivas, sete (70,00%) à Icterohaemorrhagiae e três (30,00%) à Canicola. Das 17 amostras colhidas em Cruz Alta, três (17,64%) foram positivas, duas (66,67%) à Icterohaemorrhagiae e uma (33,33%) à Canicola. É necessário melhorias nas práticas sanitárias em propriedades rurais do Estado do Rio Grande do Sul, a fim de se obter sucesso em programas locais de controle da leptospirose.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Silva K.P.C., Takaki G.M.C., Teles J.A.A., Dantas A.F.M., Costa M.M., Felix W.P. & Mota R.A. 2014. [Partially purified malleo-proteins production for glanders diagnosis in Equidae.] Produção e purificação parcial de PPD-maleína para diagnóstico do mormo em equídeos. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(1):57-61. Laboratório de Doenças Infecciosas dos Animais, Faculdade de Veterinária, Unidade Educacional Viçosa, Campus Arapiraca, Universidade Federal de Alagoas, Fazenda São Luiz s/n, Zona Rural de Viçosa, Viçosa, AL 57700-000, Brazil. E-mail: karla.ufal@gmail.com The objective of this study was to produce and partially purify Malleo-protein from Burkholderia mallei samples isolates from Equidae in Brazil with potential for use in the diagnosis of glanders. The strain B. mallei phenotypically characterized and proven virulent was inoculated into broth Dorset-Henley to grow and metabolize. The proteins were separated by trichloroacetic acid precipitation and amonium sulfate precipitation. The PPD mallein was concentrated 1.0mg/mL and biologically tested in guinea pigs. It was effective in the development of delayed-type hypersensitivity and consequently to identify true-positive animals and to exclude of true negatives. There is the possibility for potential use in the glanders diagnosis in Equidae.

• Mallein test glanders Burkholderia mallei maleinização mormo

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Silva K.P.C., Takaki G.M.C., Teles J.A.A., Dantas A.F.M., Costa M.M., Felix W.P. & Mota R.A. 2014. [Partially purified malleo-proteins production for glanders diagnosis in Equidae.] Produção e purificação parcial de PPD-maleína para diagnóstico do mormo em equídeos. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(1):57-61. Laboratório de Doenças Infecciosas dos Animais, Faculdade de Veterinária, Unidade Educacional Viçosa, Campus Arapiraca, Universidade Federal de Alagoas, Fazenda São Luiz s/n, Zona Rural de Viçosa, Viçosa, AL 57700-000, Brazil. E-mail: karla.ufal@gmail.com Objetivou-se com este estudo produzir e purificar parcialmente a PPD-maleína a partir de amostras de Burkholderia mallei isoladas de equídeos no Brasil com potencial para uso no diagnóstico do mormo. As linhagens de B. mallei fenotipicamente caracterizadas e de virulência comprovada foram inoculadas em caldo Dorset-Henley para crescer e metabolizar. Em seguida, as proteínas foram separadas por precipitação com ácido tricloroacético e precipitadas com sulfato de amônia. As PPDs-maleínas foram concentradas em 1,0mg/mL e na avaliação realizada em cobaios foi eficaz no desenvolvimento da hipersensibilidade do tipo tardia e consequentemente na identificação de animais verdadeiro positivos e exclusão dos verdadeiro negativos, sendo uma possibilidade em potencial para utilização no diagnóstico do mormo.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Carvalho V.M., Spinola T., Tavolari F., Irino K., Oliveira R.M. & Ramos M.C.C. 2014. [Urinary tract infection (UTI) in dogs and cats: etiology and antimicrobial resistance.] Infecção do trato urinário (ITU) de cães e gatos: etiologia e resistência aos antimicrobianos. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(1):62-70. Laboratório de Biologia Molecular e Celular, Universidade Paulista, Av. José Maria Whitaker 290, 3º andar, São Paulo, SP 04057-000, Brazil. E-mail: vaniamc@uol.com.br Bacterial urinary tract infections (UTIs) are a common cause of disease in dogs, cats and humans. Although Gram-positive bacteria such as Staphylococcus spp., Streptococcus spp. and Enterococcus spp. are linked with UTIs, Gram-negative bacteria (Escherichia coli, Proteus spp., Klebsiella spp., Pseudomonas spp. and Enterobacter spp.) account for 75% of the cases. This study aimed to determine the frequency of different genera of bacteria in UTIs of dogs and cats as well as their susceptibility to antimicrobials used in clinical routine. Therefore, urine samples from 100 dogs and cats suspected of UTI were collected aseptically. Samples underwent to microbiological evaluation through qualitative and quantitative methods, and urinalysis. All isolates were tested for antimicrobial susceptibility. UTI was confirmed in 74% of animals, with no predominance in one gender. With regard to age, 85% of dogs and 87% of cats were older than six years. Ninety-five bacterial strains were isolated with higher frequency of Escherichia coli (55% of total) of serogroups O6 and O2. High levels of antimicrobial resistance were found. Gram-positive strains had the highest resistance to tetracycline (46.1%), enrofloxacin, cotrimazol and streptomycin (42.3% each), while above 50% of Gram-negative were resistant to amoxicillin and tetracycline. Multidrug resistance has been observed in more than 50% of the major genera isolated. Considering the zoonotic potential of E. coli strains and its strong participation in antimicrobial resistance dissemination, the important role of the veterinarians in the prevention and control of animal UTIs and their contribution to public health must be emphasized.

• Urinary tract infection Escherichia coli trato urinário

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Carvalho V.M., Spinola T., Tavolari F., Irino K., Oliveira R.M. & Ramos M.C.C. 2014. [Urinary tract infection (UTI) in dogs and cats: etiology and antimicrobial resistance.] Infecção do trato urinário (ITU) de cães e gatos: etiologia e resistência aos antimicrobianos. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(1):62-70. Laboratório de Biologia Molecular e Celular, Universidade Paulista, Av. José Maria Whitaker 290, 3º andar, São Paulo, SP 04057-000, Brazil. E-mail: vaniamc@uol.com.br As infecções bacterianas do trato urinário (ITUs) são causa comum de doença em cães, gatos e humanos. Embora bactérias Gram positivas como Staphylococcus spp., Streptococcus spp. e Enterococcus spp., possam ocasionar ITUs, as bactérias Gram negativas (Escherichia coli, Proteus spp., Klebsiella spp., Pseudomonas spp. e Enterobacter spp.) respondem por 75% dos casos. Este estudo teve como objetivo determinar a frequência de diferentes gêneros de bactérias em ITUs em cães e gatos, bem como a sua sensibilidade aos antimicrobianos utilizados na rotina clínica. Portanto, amostras de urina de 100 cães e gatos com sinais de ITU foram coletadas assepticamente, sofrendo avaliação microbiológica por meio de métodos qualitativos e quantitativos, além de urinálise. Todos os isolados foram submetidos a testes de sensibilidade aos antimicrobianos. ITU foi confirmada em 74% dos animais, não havendo predominância quanto ao sexo. No que diz respeito à idade, 85% dos cães e 87% dos gatos tinham idades superiores a seis anos. Noventa e cinco cepas bacterianas foram isoladas, com maior frequência de Escherichia coli (55% do total) dos sorogrupos O6 e O2. Constatou-se níveis elevados de resistência a antimicrobianos nas cepas isoladas. Para as cepas Gram positivas, tetraciclina (46,1%), enrofloxacina, cotrimazol e estreptomicina (42,3% cada) foram as drogas com os maiores índices de resistência. Para as Gram negativas, amoxacilina e tetraciclina apresentaram percentuais acima de 50%. Multiresistência foi verificada em mais de 50% dos principais gêneros isolados. Considerando-se que as cepas de E. coli apresentam potencial zoonótico e forte participação na disseminação de resistência aos antimicrobianos, ressalta-se a importância do papel do médico veterinário na prevenção e controle das ITUs animais e sua contribuição para a saúde pública.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Maggioli M.F., Lobo J.R., Fioravanti M.C.S., Kipnis A. & Junqueira-Kipnis A.P. 2013. Cellular immune response of Curraleiro Pé-duro and Nellore calves following Mycobacterium bovis-BCG vaccination. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(12):1403-1408. Laboratório de Imunopatologia das Doenças Infecciosas, Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública, Rua Delenda Resende de Melo s/n, Setor Universitário, Goiânia, GO 74605050, Brazil. E-mail: apkipnis@gmail.com The present study aimed to assess the CD4, CD8 and gd blood levels for Curraleiro Pé-duro, as well as the specific IFN-g response after BCG vaccination using flow cytometry. The specific immune response against BCG was also evaluated by tuberculin skin test, performed before and 45 days after the vaccination. For comparison purposes, the same parameters were investigated on Nellore calves, an exotic bovine with resistance previously demonstrated. Naturally, Curraleiro Pé-duro animals had greater levels of CD4, CD8 and &#947;&#948; lymphocytes (p<0.05). In response to vaccine, Curraleiro Pé-duro showed greater ability to respond specifically to BCG, generating resistance profile (Th1), evidenced by greater number of antigen specific CD4+ cells producing IFN-&#947; (p<0.05) and also higher tuberculin skin test reaction (p<0.05). Additionally, vaccinated Curraleiro Pé-duro calves had higher CD4 cells numbers than both Nellore control (p<0.05) and vaccinated groups (p<0.05). Curraleiro Pé-duro calves’ higher basal lymphocytes blood level and stronger response in both IFN-&#947; and tuberculin skin test parameters probably play a positive role on protection/resistance to Mycobacterium bovis.

• Mycobacterium bovis-BCG vaccination tuberculosis vacinação com Mycobacterium bovis-BCG resistência bovina tuberculose citometria de fluxo

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Maggioli M.F., Lobo J.R., Fioravanti M.C.S., Kipnis A. & Junqueira-Kipnis A.P. 2013. Cellular immune response of Curraleiro Pé-duro and Nellore calves following Mycobacterium bovis-BCG vaccination. [Resposta imune celular de bezerros Curraleiro Pé-duro e Nelore após vacinação com Mycobacterium bovis-BCG.] Pesquisa Veterinária Brasileira 33(12):1403-1408. Laboratório de Imunopatologia das Doenças Infecciosas, Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública, Rua Delenda Resende de Melo s/n, Setor Universitário, Goiânia, GO 74605050, Brazil. E-mail: apkipnis@gmail.com O presente estudo teve como objetivo avaliar níveis sanguíneos de células CD4, CD8 e &#947;&#948; no sangue periférico de bezerros Curraleiro Pé-Duro, bem como a produção específica de IFN-&#947; por essas células em resposta à vacinação com BCG, através de citometria de fluxo. A resposta imune específica contra BCG também foi avaliada por teste tuberculínico, realizado antes e 45 dias após a vacinação. Para fins de comparação, os mesmos parâmetros foram investigados em bezerros da raça Nelore, uma raça bovina exótica com resistência demonstrado anteriormente. Naturalmente, animais da raça Curraleiro Pé-Duro apresentaram maiores níveis de CD4, CD8 e linfócitos &#947;&#948;. Em resposta a vacina, Curraleiro Pé-duro mostrou maior capacidade de responder especificamente ao BCG, gerando perfil de resistência (Th1), evidenciado pelo maior número de células CD4+ específicas produtoras de IFN-&#947; e maior reação cutânea a por tuberculina. Os maiores níveis basais de linfócitos, maior produção de IFN-&#947; e reação cutânea à prova tuberculínica provavelmente desempenham um papel positivo na proteção/resistência ao Mycobacterium tuberculosis.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Borges K.A., Furian T.Q., Borsoi A., Moraes H.L.S., Salle C.T.P. & Nascimento V.P. 2013. Detection of virulence-associated genes in Salmonella Enteritidis isolates from chicken in Southern Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(12):1416-1422. Centro de Diagnóstico e Pesquisa em Patologia Aviária, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Avenida Bento Gonçalves 8824, Porto Alegre, RS 91540-000, Brazil. E-mail: karen.borges@ufrgs.br Salmonella spp. are considered the main agents of foodborne disease and Salmonella Enteritidis is one of the most frequently isolated serovars worldwide. The virulence of Salmonella spp. and their interaction with the host are complex processes involving virulence factors to overcome host defenses. The purpose of this study was to detect virulence genes in S. Enteritidis isolates from poultry in the South of Brazil. PCR-based assays were developed in order to detect nine genes (lpfA, agfA, sefA, invA, hilA, avrA, sopE, sivH and spvC) associated with the virulence in eighty-four isolates of S. Enteritidis isolated from poultry. The invA, hilA, sivH, sefA and avrA genes were present in 100% of the isolates; lpfA and sopE were present in 99%; agfA was present in 96%; and the spvC gene was present in 92%. It was possible to characterize the isolates with four different genetic profiles (P1, P2, P3 and P4), as it follows: P1, positive for all genes; P2, negative only for spvC; P3, negative for agfA; and P4, negative for lpfA, spvC and sopE. The most prevalent profile was P1, which was present in 88% of the isolates. Although all isolates belong to the same serovar, it was possible to observe variations in the presence of these virulence-associated genes between different isolates. The characterization of the mechanisms of virulence circulating in the population of Salmonella Enteritidis is important for a better understanding of its biology and pathogenicity. The frequency of these genes and the establishment of genetic profiles can be used to determine patterns of virulence. These patterns, associated with in vivo studies, may help develop tools to predict the ability of virulence of different strains.

• Salmonella Enteritidis

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Borges K.A., Furian T.Q., Borsoi A., Moraes H.L.S., Salle C.T.P. & Nascimento V.P. 2013. Detection of virulence-associated genes in Salmonella Enteritidis isolates from chicken in Southern Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(12):1416-1422. Centro de Diagnóstico e Pesquisa em Patologia Aviária, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Avenida Bento Gonçalves 8824, Porto Alegre, RS 91540-000, Brazil. E-mail: karen.borges@ufrgs.br Salmonella spp. estão entre os principais agentes causadores de doenças transmitidas por alimentos, e o sorovar Salmonella Enteritidis é o mais frequentemente isolado no mundo. A virulência de Salmonella spp. e a sua interação com o hospedeiro são processos complexos que envolvem fatores de virulência para sobreviver às defesas do hospedeiro. O objetivo deste estudo foi detectar genes de virulência em cepas de S. Enteritidis isoladas a partir de fontes avícolas no sul do Brasil. Ensaios de PCR foram desenvolvidos para a detecção de nove genes (lpfA, agfA, sefA, invA, hilA, avrA, sopE, sivH e spvC) associados à virulência em oitenta e quatro amostras de S. Enteritidis. Os genes invA, hilA, sivH, sefA e avrA estavam presentes em 100% dos isolados; lpfA e sopE estavam presentes em 99%; agfA em 96%; e o gene spvC estava presente em 92%. Foi possível caracterizar os isolados em quatro perfis genéticos distintos (P1, P2, P3 e P4), sendo P1 positivo para todos os genes; P2 negativo apenas para spvC; P3 negativo para agfA e P4 negativo para lpfA, spvC e sopE. O perfil de maior frequência foi P1, presente em 88% dos isolados. Apesar de todos os isolados pertencerem ao mesmo sorovar, foi possível observar variações na presença de genes associados à virulência entre os mesmos. A caracterização dos mecanismos de virulência circulantes na população de Salmonella Enteritidis é importante para um maior entendimento da sua biologia e patogenicidade. A frequência destes genes e o estabelecimento de perfis genéticos podem ser utilizados para determinar os padrões de virulência dos isolados. Estes padrões, associados a estudos in vivo, podem auxiliar na elaboração de ferramentas que permitam predizer a capacidade de virulência das diferentes cepas.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Yamasaki E.M., Brito M.F., McIntosh D., Galvão A., Peixoto T.C. & Tokarnia C.H. 2013. [Imuno-histopatologic diagnosis of subclinic bovine paratuberculosis in the state of Rio de Janeiro.] Diagnóstico imuno-histopatológico da paratuberculose subclínica em bovinos no estado do Rio de Janeiro. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(12):1427-1432. Curso de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ 23890-000, Brazil. E-mail: elise_my@yahoo.com.br The early and specific diagnosis of paratuberculosis remains a challenge due to the low sensitivity of the currently available laboratory tests and also because of variations in the immune response towards infection with Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. Globally this disease causes significant economic losses, primarily in dairy cattle, owing to the chronic nature of the infection. Paratuberculosis has been described in a number of Brazilian states and from a diversity of domestic ruminant species clearly demonstrating that the disease is present in the country and highlighting the requirement for the development of diagnostic techniques for confirmation of infection and for epidemiological analyses. The aim of this study was to characterize the anatomo-histopathological and immunohistochemical findings in the bowel and mesenteric lymph nodes of assymptomatic cattle, derived from paratuberculosis positive herds located in state of Rio de Janeiro, Brazil. Macroscopic examination during necropsy revealed nonspecific changes including reddening of the gut mucosa, increased volumes for the Peyer’s patches and mesenteric lymph nodes and in some case dilation and whitening of the mesenteric lymphatic vessel. Histopathology revealed granulomatous infiltration, occasionally with the formation of giant cells in the jejunal and ileal mucosa or sub-mucosa, and/or in the cortical region of the mesenteric lymph nodes, in 32 of the 52 cattle examined. Tissue sections from these animals were subjected to Ziehl-Neelsen staining, but the presence of acid-fast bacilli was not observed. Subsequent analysis, employing genus specific immunohistochemisty for Mycobacterium, revealed areas of immunoreactivity in sections prepared from a total of six animals. The results of this investigation highlighted the value of histopathology and particularly immunohistochemistry as tools for the diagnosis of subclinical paratuberculosis.

• Paratuberculosis Johne´s disease paratuberculose doença de Johne

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Yamasaki E.M., Brito M.F., McIntosh D., Galvão A., Peixoto T.C. & Tokarnia C.H. 2013. [Imuno-histopatologic diagnosis of subclinic bovine paratuberculosis in the state of Rio de Janeiro.] Diagnóstico imuno-histopatológico da paratuberculose subclínica em bovinos no estado do Rio de Janeiro. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(12):1427-1432. Curso de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ 23890-000, Brazil. E-mail: elise_my@yahoo.com.br O diagnóstico precoce e específico da paratuberculose ainda é um desafio. Isto pode estar associado à baixa sensibilidade dos testes laboratoriais e ou à variação da resposta imunológica frente à infecção por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. Mundialmente, é uma enfermidade que causa importantes prejuízos econômicos, em especial, à bovinocultura leiteira, devido ao caráter crônico da infecção. No Brasil, a paratuberculose já foi descrita em diversas espécies de ruminantes domésticos e em vários estados, o que demonstra que a enfermidade está presente em território nacional e há a necessidade de elaboração de técnicas de diagnóstico para a confirmação da infecção. O objetivo deste trabalho foi caracterizar os achados anátomo-histopatológicos e imuno-histoquímicos em intestino e linfonodos mesentéricos de bovinos assintomáticos, provenientes de rebanhos positivos para paratuberculose localizados no estado do Rio de Janeiro, Brasil. O estudo macroscópico revelou alterações inespecíficas tais como áreas avermelhadas na mucosa do intestino, aumento do volume das placas de Peyer e dos linfonodos mesentéricos, além disso, observou-se que vasos linfáticos mesentéricos estavam dilatados e esbranquiçados. Do total de 52 vacas leiteiras avaliadas, a histopatologia revelou infiltração granulomatosa, por vezes com formação de células gigantes multinucleadas, em mucosa e ou submucosa de jejuno, íleo e em linfonodos mesentéricos, principalmente na região cortical, em 32 animais. Estes bovinos foram submetidos à coloração de Ziehl-Neelsen cujo teste não demonstrou reação positiva, no entanto, quando analisados pelo teste imunohistoquímico para Mycobacterium spp. observou-se imunorreação em 6 animais. Desta forma, a histopatologia e imunohistoquímica pode ser uma importante ferramenta para diagnóstico da paratuberculose subclínica.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Cassenego A.P.V., Ellwanger J., d’Azevedo P.A., Ribeiro A.M.L., frazzon J. & frazzon A.P.G. 2013. [Virulence and biofilm formation by Enterococcus faecalis isolates from cloacal swabs of broilers infected with Eimeria spp.] Virulência e formação de biofilme microbiano por Enterococcus faecalis isolados de swabs cloacais de frangos de corte infectados com Eimeria spp. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(12):1433-1440. Departamento de Microbiologia, Instituto de Ciências Básicas da Saúde, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Rua Sarmento Leite 500, Porto Alegre, RS 90050-170, Brazil. E-mail: ana.cassenego@ufrgs.br The microbiota dynamics in the gastrointestinal tract (GT) of animals can be disrupted by pathogens, such as Eimeria spp. Enterococci are saprophytic bacteria that colonize the GT of mammals and birds. The influence on the intestinal microbiota is related to the adaptive capacity of bacteria to adhere to host cells and colonize the mucosal cells. The aim of this study was to analyze the frequency of virulence genes ace, agg and bopABCD operon in Enterococcus faecalis isolated from cloacal swabs of broilers challenged with Eimeria spp. and fed with a standard diet supplemented or not with anticoccidial (monensin), and, also to evaluate for the ability of these strains to form biofilms under in vitro conditions. A total of 70 E. faecalis were selected and the agg gene was more frequent in strains isolated from the broilers treated with anticoccidial (92.3%) when compared to the group that not received anticoccidial (70.5%). On the other hand, the ace and bopABCD operon genes showed no significant difference between the two groups of broilers (P>0.005). The E. faecalis isolated from the broilers treated with anticoccidial showed a higher frequency of strong biofilm formation when growing in medium supplemented with glucose (92.3-88.5%) and urine (77%) when compared with enterococci isolated from broilers that not received anticoccidial. It was observed that E. faecalis isolated from broilers treated with anticoccidial showed a higher frequency of virulence factors genes and stronger biofilms formation, indicating better adaptation of the isolates in healthy intestinal environment.

• Enterococcus faecalis Eimeria spp.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Cassenego A.P.V., Ellwanger J., d’Azevedo P.A., Ribeiro A.M.L., frazzon J. & frazzon A.P.G. 2013. [Virulence and biofilm formation by Enterococcus faecalis isolates from cloacal swabs of broilers infected with Eimeria spp.] Virulência e formação de biofilme microbiano por Enterococcus faecalis isolados de swabs cloacais de frangos de corte infectados com Eimeria spp. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(12):1433-1440. Departamento de Microbiologia, Instituto de Ciências Básicas da Saúde, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Rua Sarmento Leite 500, Porto Alegre, RS 90050-170, Brazil. E-mail: ana.cassenego@ufrgs.br A dinâmica da microbiota no trato gastrointestinal (TG) de animais pode ser afetada por patógenos, tais como Eimeria spp. Os enterococos são bactérias saprófitas que colonizam o TG de mamíferos e aves. A influência sobre a microbiota intestinal está relacionada com a capacidade de adaptação das bactérias em se aderir às células hospedeiras e de colonizar as células das mucosas. O objetivo deste estudo foi analisar a frequência de genes de virulência ace, agg e operon do bopABCD em Enterococcus faecalis isolados de swabs cloacais de frangos de corte desafiados com Eimeria spp e alimentados com dietas padrões suplementadas ou não com anticoccidiano (monesina) e também avaliar a capacidade dessas cepas em formar biofilmes sob condições in vitro. Um total de 70 E. faecalis foram selecionadas e o gene agg foi mais freqüente em cepas isoladas de frangos de corte alimentados com anticoccidiano (92,3%) quando comparado ao grupo que não recebeu anticoccidiano (70,5%). Por outro lado, os genes ace e do operon bopABCD não demostraram nenhuma diferença significativa entre os dois grupos de frangos (P>0,005). Os E. faecalis isolados de frangos de corte alimentados com anticoccidiano demostraram uma maior frequência de fortes aderentes quando crescendo em meio suplementado com glicose (92,3-88,5%) e urina (77%), quando comparado com enterococos isolados de frangos que não receberam anticoccidiano. Observou-se que E. faecalis isolados de frangos tratados com anticoccidiano mostraram uma maior frequêencia dos genes dos fatores de virulência e de perfil de fortes formadores de biofilme, o que indica uma melhor adaptação dos isolados em ambiente intestinal saudável.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Rebouças M.F., Loureiro D., Bastos B.L., Moura-Costa L.F., Hanna S.A., Azevedo V., Meyer R. & Portela R.W. 2013. Development of an indirect ELISA to detect Corynebacterium pseudotuberculosis specific antibodies in sheep employing T1 strain culture supernatant as antigen. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(11):1296-1302. Laboratório de Imunologia e Biologia Molecular, Instituto de Ciências da Saúde, Universidade Federal da Bahia, Av. Reitor Miguel Calmon s/n, Vale do Canela, Salvador, BA 40110-100, Brazil. E-mail: rwportela@gmail.com Corynebacterium pseudotuberculosis is the etiologic agent of caseous lymphadenitis (CLA), a chronic disease that affects goats and sheep, characterized by granuloma formation in subcutaneous and internal lymph nodes. CLA causes significant economic losses to commercial goat herds. In this study, we aimed to test secreted antigens secreted from T1 strain bacteria grown in brain heart infusion (BHI) broth in an indirect ELISA system to determine the presence of specific immunoglobulins against C. pseudotuberculosis. We analyzed the BHI antigen electrophoretic profile and the recognition pattern by infected sheep sera samples. The ELISA results were compared with multiplex PCR assay and IFN-gamma production. The ELISA was able to discriminate between negative and positive animals, with a sensitivity of 89% and a specificity of 99%, using microbiological isolation as gold standard. When this assay was compared with multiplex PCR and specific IFN-gamma quantification, six discrepant results were found among thirty-two samples. We concluded that the ELISA using antigens secreted from C. pseudotuberculosis T1 strain growth in BHI broth culture can be used for the serodiagnosis of CLA in sheep.

• Caseous lymphadenitis Corynebacterium pseudotuberculosis linfadenite caseosa

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Rebouças M.F., Loureiro D., Bastos B.L., Moura-Costa L.F., Hanna S.A., Azevedo V., Meyer R. & Portela R.W. 2013. Development of an indirect ELISA to detect Corynebacterium pseudotuberculosis specific antibodies in sheep employing T1 strain culture supernatant as antigen. [Desenvolvimento de ELISA indireto para detectar anticorpos específicos contra Corynebacterium pseudotuberculosis em ovinos utilizando o supernadante de cultura da cepa T1 como antígeno.] Pesquisa Veterinária Brasileira 33(11):1296-1302. Laboratório de Imunologia e Biologia Molecular, Instituto de Ciências da Saúde, Universidade Federal da Bahia, Av. Reitor Miguel Calmon s/n, Vale do Canela, Salvador, BA 40110-100, Brazil. E-mail: rwportela@gmail.com Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente etiológico da linfadenite caseosa (LC) uma doença crônica que afeta ovinos e caprinos caracterizada pela formação de granulomas em linfonodos. A LC causa perdas econômicas significativas em criações de pequenos ruminantes. Este trabalho teve como objetivo testar antígenos secretados da cepa T1 da bactéria em um sistema de ELISA indireto para detecção de anticorpos específicos contra C. pseudotuberculosis. O perfil eletroforético do antígeno foi analisado, bem como o padrão de reconhecimento por soros de animais infectados. Os resultados do ELISA foram comparados com ensaio de multiplex PCR e com teste de indução de produção específica de IFN-gama. O ELISA foi capaz de discriminar animais positivos de animais negativos, com sensibilidade de 89% e especificidade de 99%, usando o isolamento microbiológico como padrão ouro. Quando o ensaio foi comparado com o multiplex PCR e a produção específica de IFN-gama, somente seis resultados discrepantes foram encontrados em trinta e duas amostras. Pode-se concluir que o ensaio de ELISA desenvolvido pode ser utilizado com alto grau de confiança para o diagnóstico da LC em ovinos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Alves B.H.L.S., Silva J.G., Mota A.R., Campos A.C., Pinheiro Júnior J.W., Santos S.B. & Mota R.A. 2013. Mycoplasma agalactiae in semen and milk of goat from Pernambuco State, Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(11):1309-1312. Laboratório de Bacterioses dos Animais Domésticos, Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Av. Dom Manoel de Medeiros s/n, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: sanbsantos@gmail.com In goat and sheep flocks, mycoplasmosis is a disease that may cause severe economical losses associated with polyarthritis, mastitis, agalactia, conjunctivitis, pneumonia and reproductive failure. The latter may involve repeat breeding, granular vulvovaginitis, infertility and abortions. The aim of the present study was to assess the occurrence of Mycoplasma agalactiae (Ma) in semen and milk samples from naturally infected goat in the semiarid region from Pernambuco State, Northeast from Brazil. Thirty-nine semen samples and 81 milk samples were submitted to DNA extraction using a commercially available kit and following the manufacturer’s instructions. The polymerase chain reaction (PCR) was then performed in accordance with protocols described in the literature. The results of the present study revealed the presence of Ma in the DNA of 17.9% (7/39) of the semen samples and 3.7% (3/81) of the milk samples. The results obtained in the present study confirm the elimination of the DNA of Ma in the semen and milk samples. The presence of this agent in goat flocks is considered very risky in terms of reproductive disorders and contagious agalactia outbreaks in the Northeast region of Brazil.

• Mycoplasma agalactiae semen milk sêmen leite

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Alves B.H.L.S., Silva J.G., Mota A.R., Campos A.C., Pinheiro Júnior J.W., Santos S.B. & Mota R.A. 2013. Mycoplasma agalactiae in semen and milk of goat from Pernambuco State, Brazil. [Mycoplasma agalactiae em sêmen e leite de caprinos do Estado de Pernambuco.] Pesquisa Veterinária Brasileira 33(11):1309-1312. Laboratório de Bacterioses dos Animais Domésticos, Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Av. Dom Manoel de Medeiros s/n, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: sanbsantos@gmail.com Em caprinos e ovinos as micoplasmoses causam sérias perdas econômicas associadas com poliartrites, mastites, agalaxia, conjuntivite, pneumonias e falhas reprodutivas. Esta última pode envolver repetição de cio, vulvovaginite granular, infertilidade e abortos. O objetivo desse estudo foi verificar a ocorrência de Mycoplasma agalactiae (Ma) em sêmen e leite de caprinos naturalmente infectados procedentes de regiões semiáridas do Estado de Pernambuco, Nordeste do Brasil. Foram usadas 39 amostras de sêmen e 81 de leite, as quais foram submetidas à extração do DNA genômico usando um kit comercial, seguindo as instruções do fabricante. A reação da PCR foi realizada de acordo com protocolo previamente descrito na literatura. Os resultados revelaram a presença de DNA de Ma nas amostras de sêmen com uma frequência de 17,9% (7/39) e no leite a frequência encontrada foi de 3,7% (3/81). Os resultados obtidos no presente estudo confirmam a eliminação de DNA de Ma nas amostras de sêmen e leite analisadas. A presença deste agente nos rebanhos caprinos pode ser considerada um risco para doenças reprodutivas e surtos de agalaxia contagiosa na região Nordeste do Brasil.