PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Madruga C.R., Marques A.P.C., Leal C.R.B., Carvalho C.M.E., Araújo F.R. & Kessler R.H. 2000. Evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay to detect antibodies against Anaplasma marginale. [Avaliação de uma prova de imunoadsorção enzimática para detecção de anticorpos contra Anaplasma marginale.] Pesquisa Veterinária Brasileira 20(3):109-112. Embrapa Gado de Corte, Rodovia BR 262 Km 4, Cx. Postal 154, Campo Grande, MS 79002-970, Brazil. A rapid indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed for measuring antibodies against Anaplasma marginale using a partially soluble antigen prepared from semipurified initial bodies from erythrocytes with 80.0% of rickettsiaemia. This technique utilized alkaline phosphatase and p-nitrophenyl phosphate as reaction indicators. The high sensitivity (100.0%) was confirmed with sera from 100 calves experimentally-infected with A. marginale. All of these animals showed seroconversion before or at the same time of the first rickettsiaemia or even when it was not detected. Also the elevated specificity (94.0%) was confirmed by the low percentage of cross-reactions with sera from animals experimentally-infected with Babesia bigemina and Babesia bovis (1.4 and 6.6%, respectively). Performances of ELISA and indirect fluorescent antibody test (IFAT) with 324 sera from enzootically stable area did not show statistical difference (P>0.05), since the former showed 96.9% and the latter 97.2% of positive reactions. The advantage of this ELISA is a shorter execution time than others developed until now, allowing more samples to be analyzed.

• Anaplasma marginale ELISA serological tests cattle testes sorológicos bovino.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Madruga C.R., Marques A.P.C., Leal C.R.B., Carvalho C.M.E., Araújo F.R. & Kessler R.H. 2000. Evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay to detect antibodies against Anaplasma marginale. [Avaliação de uma prova de imunoadsorção enzimática para detecção de anticorpos contra Anaplasma marginale.] Pesquisa Veterinária Brasileira 20(3):109-112. Embrapa Gado de Corte, Rodovia BR 262 Km 4, Cx. Postal 154, Campo Grande, MS 79002-970, Brazil. Um ensaio de imunoadsorção enzimática (ELISA) indireto, foi desenvolvido para detecção de anticorpos contra Anaplasma marginale, utilizando um antígeno parcialmente solúvel preparado a partir de corpúsculos iniciais semipurificados de eritrócitos com 80,0% de parasitemia. Esta técnica utilizou a fosfatase alcalina e o p-nitrofenil fosfato como indicadores de reação. A alta sensibilidade (100,0%) foi comprovada com soros ele 100 bezerros experimentalmente infectados com A. marginale. Todos estes animais soroconverteram antes ou ao mesmo tempo que a primeira parasitemia foi detectada, ou mesmo quando não se obteve parasitemia. A elevada especificidade (94,0%) foi confirmada pela baixa percentagem ele reações cruzadas com soros de animais infectados experimentalmente com Babesia bigemina e Babesia bovis (1,4 e 6,6%, respectivamente). Os desempenhos do ELISA e da imunofluorescência indireta (IFI) com 324 soros de uma área de estabilidade enzoótica não diferiram estatisticamente (P>0,05), uma vez que o primeiro teste detectou 96,9% de reações positivas, enquanto o segundo, 97,2%. A vantagem deste ELISA foi um menor tempo ele execução do que outros desenvolvidos até o momento, permitindo a análise de um maior·número de soros.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Paredes J.C.M., Oliveira L.G., Braga A.C., Trevisol I.M. & Roehe P.M. 1999. Development and standardization of an indirect ELISA for the serological diagnosis of classical swine fever. [Desenvolvimento e padronização de um ELISA indireto para o diagnóstico sorológico de peste suína clássica.] Pesquisa Veterinária Brasileira, 19(3/4):123-127. Equipe de Virologia, FEPAGRO- Centro de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor, Caixa Postal 2076, Porto Alegre, RS 90001-970, Brazil. An indirect enzyme linked immunoassay (ELISA-I) was developed and standardized for the serological diagnosis of classical swine fever (CSF). For the comparison, nine hundred and thirty-seven swine serum samples were tested by serum neutralization followed by immunoperoxidase staining (NPLA), considered ·as the standard. Of these, 223 were positive and 714 negative for neutralizing antibodies to classical swine fever virus (CSFV). In relation to the NPLA, the ELISA-I presented a 98.2% sensitivity; 92.86% specificity, 81.11% positive predictive value, 99.4% negative predictive value and a 94.1% precision. Statistical analysis showed a very strong correlation (r=0,94) between both tests. When compared to a commercially available ELISA kit, the performance of both, in relation to the NPLA, was simila1: It was concluded that the ELISA-I is suitable for large scale screening of antibodies to classical swine fever virus, although it does not distinguish antibodies to classical swine fever vírus from those induced by other pestiviruses.

• Classical swine fever classical swine fever virus ELISA serology Peste suína clássica vírus da peste suína clássica soroiogia.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Paredes J.C.M., Oliveira L.G., Braga A.C., Trevisol I.M. & Roehe P.M. 1999. Development and standardization of an indirect ELISA for the serological diagnosis of classical swine fever. [Desenvolvimento e padronização de um ELISA indireto para o diagnóstico sorológico de peste suína clássica.] Pesquisa Veterinária Brasileira, 19(3/4):123-127. Equipe de Virologia, FEPAGRO- Centro de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor, Caixa Postal 2076, Porto Alegre, RS 90001-970, Brazil. Um ensaio imunoenzimático do tipo ELISA indireto (ELISA-I) foi desenvolvido e padronizado para o diagnóstico sorológico de peste suína clássica. Na comparação foram utilizadas novecentas e trinta e sete amostras de soros suínos, as quais foram testadas pelo teste de soroneutralização seguido de revelação por imunoperoxidase (NPLA), tomado como padrão, resultando em 223 amostras positivas e 714 negativas. Em relação ao NPLA, o ELISA-I apresentou sensibilidade de 98,21%, especificidade de 92,86%, valor preditivo positivo de 81, 11%, valor preditivo negativo de 99,4% e precisão de 94, 1 %. A análise estatística dos resultados revelou uma correlação muito forte (r=0,94) entre os dois testes. Quando comparado com um "kit" de ELISA disponível comercialmente, a performance de ambos em relação ao NPLA foi similar. Concluiu-se que o ELISA-I é um teste apropriado para triagem em larga escala de soros para a detecção de anticorpos contra o Vírus da Peste Suína Clássica (VPSC), embora não seja capaz de diferenciar entre anticorpos induzidos pelo VPSC ou outros pestivírus.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Molnár É., Molnár L., Dias H. T., Silva A.O.A. & Vale W.G. 1999. [Occurrence of enzootic bovine leukosis in the State of Pará, Brazil.] Ocorrência da leucose enzoótica dos bovinos no Estado do Pará, Brasil. Pesquisa Veterinária Brasileira 19(1):7-11. Laboratório de Investigação e Diagnóstico de Enfermidade Animal, Centro Agropecuário, Universidade Federal do Pará, Belém, PA 66075-900, Brazil. The occurrence of the infection with Bovine Leukosis Virus (BLV) was examined in agar-gel immunodiffusion (AGID) test and with indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), in the State of Pará, Brazil. The blood sera were collected from different breeds including Nelore, Piemontes, Si mental, Holstein Frisian, Indubrasil, Girolanda, Sim brasil and their crossbreedings. The majority of the animals were adults. The overall occurrence of infections was 49.8% (359/721) and 26.0% (174/668) for ELISA and AGID test, respectively. All animal groups examined showed infection in ELISA, however in the AGID test two groups were sera negative.

• Enzootic bovine Ieukosis indirect ELISA immunodiffusion bovine leukemia bovine Leucose Enzoótica dos Bovinos ELISA indireto imunodifusão.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Molnár É., Molnár L., Dias H. T., Silva A.O.A. & Vale W.G. 1999. [Occurrence of enzootic bovine leukosis in the State of Pará, Brazil.] Ocorrência da leucose enzoótica dos bovinos no Estado do Pará, Brasil. Pesquisa Veterinária Brasileira 19(1):7-11. Laboratório de Investigação e Diagnóstico de Enfermidade Animal, Centro Agropecuário, Universidade Federal do Pará, Belém, PA 66075-900, Brazil. A ocorrência da infecção pelo Vírus da Leucose Enzoótica dos Bovinos (BLV) no Estado do Pará, foi estudada através do método de imunodifusão em ágar-gel (AGID) e por um ensaio imunoenzimatico (ELISA) indireto, paralelamente. Os exames foram realizados com amostras de soros sanguíneos oriundos de bovinos de diferentes raças sendo a maioria deles adultos. A prevalência observada foi de 49,8% (359/721) no ELISA e 26,0% (174/668) no AGID. Todos os 14 grupos dos animais estudados pelo ELISA indireto, mostraram a existência da infeção, enquanto que pelo método da AGID, dois grupos de animais foram negativos.

Abstract in English:

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed for detection of botulinum type D toxin. The double antibody sandwich ELISA was performed with reference to botulinum type D antitoxin (Statens Seruminstitut, Denmark) as in the solid phase, to sensitize plastic surface, as in the production of the immunoenzymatic conjugate. The sensitivity of ELISA was evaluated by using various dilutions of botulinum type D toxin added to liquid culture or a pool of normal bovine serum. The reactivity was, respectively, 15.6 LD50\ml and 31.2 LD50\ml for mice, with absorbance measured spectrophotometrically at 450 nm using an ELISA microreader. The specificity was demonstrated by the absence of reactivity with botulinum type A, B and E, tetanic and diphteric toxins. However, botulinum type C toxin indicated a partial cross-reactivity dueto comparable common antigenic determinants between type C and D toxins. Considering the results presented in this paper it can be concluded that the assay is particulary useful as a sensitive, fast and efficient screening method for detection of botulinum type D toxin, but it has the sarne limitations for the direct diagnosis of botulism in cattle as encountered with the bioassay in mice, because of the low concentration of circtilating toxin.

• Botulism serologic diagnostic ELISA

Abstract in Portuguese:

Foi desenvolvido um teste imunoenzimático (ELISA) capaz de detectar toxina botulínica tipo D. A técnica empregada foi a de Duplo Anticorpo (ELISA "Sandwich") utilizando-se antitoxinas botulínicas tipo D de referência (Statens Seruminstitut, Dinamarca) tanto na fase de sensibilização das microplacas de polivinilcloreto como para a produção do conjugado imunoenzimático (antisoro botulínico tipo D ligado à peroxidase). A sensibilidade do teste foi verificada através de titulações de toxina botulínica tipo D em fluidos de cultura e adicionada a "pool" de soro bovino normal, resultando em reatividade correspondendo respectivamente a 15,6 DL50\ml e 31,2 DL50\ml para camundongos, determinada espectrofotometricamente em leitor de microplacas. A especificidade, por sua vez, foi demonstrada pela ausência de reatividade com os diferentes tipos de toxinas botulínicas A, B e E, toxinas tetânica e diftérica. Entretanto, foi observado reatividade cruzada parcial com a toxina botulínica tipo C, devido às semelhanças antigênicas entre as toxinas tipos C e D. A partir dos resultados obtidos, concluiu-se que o referido teste pode ser utilizado como um método de triagem, sensível, rápido e eficaz para a detecção de toxina botulínica tipo D, embora, especificamente para o diagnóstico direto do botulismo do bovino, o método tem as mesmas limitações do bioensaio em camundongos por causa da baixa concentração de toxina circulante.

• Botulismo diagnóstico sorológico ELISA