PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

Caseous lymphadenitis (CLA) is a chronic infectious disease caused by Corynebacterium pseudotuberculosis, resulting in significant economic losses in sheep and goat farming. Considering limited treatment options, the use of natural compounds has emerged as a promising alternative. This study aimed to evaluate the antibacterial potential of essential oils from Lippia origanoides (EOLO) and Ocimum micranthum (EOOM) against C. pseudotuberculosis strains isolated from small ruminants with clinical CLA. Thirty isolates were genotypically characterized using quadruplex polymerase chain reaction (PCR) (16S rRNA, rpoB, pld, narG genes). The essential oils were extracted by hydrodistillation, and their chemical compositions were analyzed by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). Antibacterial activity was determined by disk diffusion and broth microdilution assays. Minimum inhibitory concentration resulting in complete growth inhibition (MIC₁₀₀) and minimum bactericidal concentrations leading to complete bacterial eradication (MBC₁₀₀) were determined. Susceptibility to penicillin and tetracycline was assessed by disk diffusion. All strains were confirmed as biovar ovis (16S rRNA⁺, rpoB⁺, pld⁺, narG⁻). EOLO presented thymol (66.23%) as the major compound, while eugenol (38.62%) was the principal constituent in EOOM. EOLO exhibited large inhibition zone diameters (IZD), ranging from 40.67 mm to 98.33 mm, indicating strong activity. EOOM also demonstrated strong inhibition, with IZD values between 18.67 mm and 31.67 mm. All isolates were classified as “I” for penicillin (susceptible, increased exposure) and as susceptible (“S”) to tetracycline. EOLO showed MIC₁₀₀ values ranging from 15 to 250 µg/mL, while EOOM ranged from 62.5 to 125 µg/mL. MBC₁₀₀ values ranged from 125 to 1,000 µg/mL. This study seems to be the first report of the in vitro antibacterial activity of EOLO and EOOM against C. pseudotuberculosis, highlighting their potential as effective, natural alternatives for the treatment and control of CLA in small ruminants.

• Bactericidal activity Lippia origanoides Ocimum micranthum essential oil small ruminants

Abstract in Portuguese:

A linfadenite caseosa (LC) é uma doença infecciosa crônica causada pela bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis que provoca perdas econômicas significativas na ovinocaprinocultura. Considerando que as opções de tratamento são limitadas, o uso de compostos naturais representa uma alternativa promissora. O presente estudo teve como objetivo avaliar o potencial antibacteriano dos óleos essenciais de Lippia origanoides (EOLO) e Ocimum micranthum (EOOM) contra cepas de C. pseudotuberculosis isoladas de pequenos ruminantes com LC. Trinta isolados foram caracterizados genotipicamente usando reação em cadeia da polimerase (PCR) quadruplex (genes 16S rRNA, rpoB, pld, narG). Os óleos essenciais foram extraídos por hidrodestilação e suas composições químicas foram analisadas por cromatografia gasosa e espectrometria de massas (GC-MS). A atividade antibacteriana foi determinada por ensaios de disco-difusão e microdiluição em caldo. As concentrações inibitórias mínimas capazes de promover inibição completa do crescimento (CIM₁₀₀) e as concentrações bactericidas mínimas responsáveis pela erradicação bacterina completa (CBM₁₀₀) foram determinadas. A suscetibilidade à penicilina e à tetraciclina foi avaliada por difusão em disco. Todas as cepas foram confirmadas como biovar ovis (16S rRNA⁺, rpoB⁺, pld⁺, narG⁻). O EOLO apresentou o timol (66,23%) como o composto majoritário, enquanto o eugenol (38,62%) foi o principal constituinte do EOOM. O EOLO apresentou diâmetro de zona de inibição (DZI) variando de 40,67 mm a 98,33 mm, indicando forte atividade antibacteriana. O EOOM também demonstrou forte capacidade de inibição, com valores de DZI entre 18,67 mm e 31,67 mm. Todos os isolados apresentaram classificação “I” para penicilina (susceptível, com aumento da exposição) e foram classificados como sensíveis (“S”) à tetraciclina. A CIM₁₀₀ do EOLO variou de 15 a 250 μg/mL, enquanto a do EOOM variou de 62,5 a 125 μg/mL. Os valores de CBM₁₀₀ variaram de 125 a 1.000 μg/mL. Este estudo parece ser o primeiro relato da atividade antibacteriana in vitro de EOLO e EOOM contra C. pseudotuberculosis, destacando o potencial desses óleos como alternativa naturais e eficazes para o tratamento e controle de LC em pequenos ruminantes.

• Atividade bactericida Lippia origanoides Ocimum micranthum óleo essencial pequenos ruminantes

Abstract in English:

ed to evaluate the antibacterial properties of 39 heterocyclic derivatives (1,3-thiazoles and 4-thiazolidinones) against clinical mastitis isolates from dairy cows. Milk samples were collected from cows with clinical mastitis and the bacterial species were identified by PCR. Antibacterial activity was assessed using the broth microdilution method. First, 39 heterocyclic compounds were tested against four bacterial isolates (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium bovis and Escherichia coli) randomly chosen from those recovered from the milk samples (Study 1). Subsequently, the compounds with the strongest antibacterial activity were tested against all the bacterial isolates recovered from the milk samples (Study 2). 1,3-thiazoles showed the strongest antibacterial activity, specially compounds 30 and 38, which also showed bactericidal properties according to their minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) values. Corynebacterium spp. and Enterobacteriaceae isolates were the most susceptible to compounds 30 and 38. Compounds 30 and 38 are promising targets for new antimicrobial agents.

• Heterocyclic compounds clinical mastitis thiazole derivatives thiazolidinone derivatives biological activity antibacterial activity MIC MBC

Abstract in Portuguese:

A mastite causa significativas perdas econômicas à indústria leiteira bovina. O presente estudo teve como objetivo avaliar as propriedades antibacterianas de 39 derivados heterocíclicos (1,3-tiazóis e 4-tiazolidinonas) contra isolados clínicos de mastite em vacas leiteiras. Amostras de leite foram coletadas de vacas com mastite clínica e as espécies bacterianas isoladas foram identificadas por PCR. A atividade antibacteriana foi avaliada pelo método de microdiluição em caldo. Primeiramente, os 39 compostos heterocíclicos foram testados contra quatro isolados bacterianos (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium bovis e Escherichia coli) escolhidos aleatoriamente dentre os recuperados das amostras de leite (Estudo 1). Posteriormente, compostos com atividade antibacteriana mais forte foram testados contra todos os isolados bacterianos recuperados das amostras de leite (Estudo 2). Os compostos 1,3-tiazóis apresentaram a maior atividade antibacteriana, principalmente os compostos 30 e 38, que também apresentaram propriedades bactericidas de acordo com seus valores de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM). Os isolados Corynebacterium spp. e Enterobacteriaceae foram os mais suscetíveis aos compostos 30 e 38. Os compostos 30 e 38 mostraram-se promissores como novos agentes antimicrobianos.

• Compostos heterocíclicos mastite clínica derivados de tiazóis derivados de tiazolidinonas atividade biológica atividade antibacteriana CIM CBM

Abstract in English:

ABSTRACT.- Moreira G.M.B., Matsumoto L.S., Silva R.M.G., Domingues P.F. & Mello-Peixoto E.C.T. 2014. [Antibacterial activity of the hydroalcoholic extract of Punica granatum Linn. on Staphylococcus spp. isolated from bovine milk.] Atividade antibacteriana do extrato hidroalcoólico de Punica granatum Linn. sobre Staphylococcus spp. isolados de leite bovino. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(7):626-632. Centro de Ciências Agrárias, Universidade Estadual do Norte do Paraná, Campus Luiz Meneghel, BR-369 Km 54, Vila Maria, Cx. Postal 26, Bandeirantes, PR 86360-000, Brazil. E-mail: emellopeixoto@uenp.edu.br Bovine mastitis is characterized by inflammation of the mammary gland, usually in response to bacterial infection, affecting qualitatively and quantitatively milk production. This study aimed to determine the antibacterial activity in vitro of the hydroalcoholic extract of the bark of the pomegranate on bacteria isolated from bovine milk. The colonies of Staphylococcus spp. were resuspended in 6 MacFarland scale and adjusted its concentration by UV visible spectrophotometry at a concentration of 106ml-1. The extracts were evaluated in quintuplicate in seven concentrations: from 4 up to 0.0625mg.mL-1. The sensitivity of microbial isolates was determined using the disk diffusion and the results that showed inhibition halos corresponding to values from 15mm were considered susceptible. The results were evaluated by ANOVA, Tukey test 5% using the SISVAR 5.3-DEX/UFLA. Additionally the extract was assessed as for the antioxidant activity, content of phenols and total flavonoids. The extract was diluted into seven concentrations: 25-1.000μg.mL-1, and evaluated in triplicate. The bacterial growth was inhibited starting from the concentration of 4 mg.mL-1 and antioxidant activity was observed from 50μg.mL-1, with values corresponding to 4.62% reaching the plateau of 64.90% at a concentration of 500μg.mL-1. In evaluating the radical scavenging activity, using the free radical DPPH, the extract demonstrated antioxidant activity (IC50%= 378.80µg/mL). However it has not been possible to correlate the antioxidant activity with the levels of phenols and flavonoids. Perhaps the presence of other substances alkaloids and tannins present in the extracts may have been responsible for the antioxidant activity found. It was concluded that the hydroalcoholic extract of Punica granatum Linn. has antimicrobial activity against Staphylococcus spp., demonstrating potential benefit for the control of bovine mastitis.

• Mastitis medicinal plants Pomegranate mastite plantas medicinais romã

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Moreira G.M.B., Matsumoto L.S., Silva R.M.G., Domingues P.F. & Mello-Peixoto E.C.T. 2014. [Antibacterial activity of the hydroalcoholic extract of Punica granatum Linn. on Staphylococcus spp. isolated from bovine milk.] Atividade antibacteriana do extrato hidroalcoólico de Punica granatum Linn. sobre Staphylococcus spp. isolados de leite bovino. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(7):626-632. Centro de Ciências Agrárias, Universidade Estadual do Norte do Paraná, Campus Luiz Meneghel, BR-369 Km 54, Vila Maria, Cx. Postal 26, Bandeirantes, PR 86360-000, Brazil. E-mail: emellopeixoto@uenp.edu.br Mastite bovina é caraterizada por inflamação da glândula mamária, geralmente em resposta à infecção bacteriana, compromete quali-quantitativamente a produção leiteira. Este estudo objetivou verificar a atividade antibacteriana in vitro do extrato hidroalcoólico da casca da romã sobre bactérias isoladas de leite bovino. As colônias de Staphylococcus spp. foram ressuspendidas a escala 6 de MacFarland e ajustada a sua concentração por espectrofotometria UV visível na concentração de 10 mL-1. Os extratos foram avaliados em quintuplicata, em sete concentrações: de 4mg mL-1 até 0,0625 mg.mL-1. A sensibilidade dos isolados microbianos foi determinada utilizando o teste de difusão em disco e os resultados que apresentaram zonas de inibição correspondentes a valores a partir de 15 mm, foram considerados sensíveis. Os resultados foram avaliados pelo método ANOVA, teste de Tukey 5%, utilizando o SISVAR 5.3 - DEX/UFLA. Adicionalmente o extrato foi avaliado quanto à atividade antioxidante, teores de fenóis e flavonoides totais. Para tanto o extrato foi diluído em sete concentrações: de 25 a 1000μg.mL-1, e avaliado em triplicata. O crescimento bacteriano foi inibido a partir da concentração de 4mg.mL-1 e a ação antioxidante foi verificada a partir de 50μg.mL-1, com valores correspondentes a 4.62%, atingindo platô de 64,90% na concentração de 500μg.mL-1. Na avaliação da atividade captadora de radicais, empregando o radical livre DPPH, o extrato demonstrou atividade antioxidante (IC50%= 378,80µg/mL). Porém, não foi possível correlacionar a atividade antioxidante aos teores de fenóis e flavonoides. Talvez a presença de outras substâncias alcaloides e taninos presentes no extrato, possam ter sido as responsáveis pela atividade antioxidante encontrada. Conclui-se que o extrato hidroalcoólico de Punica granatum Linn. apresenta atividade antimicrobiana contra Staphylococcus spp., demonstrando potencial benefício para o controle da mastite bovina.