Abstract in English:
Garcia M., Sertório S. P., Alves G. J., Chate S. C., Carneiro S. & Lallo M.A. 2004. [Ovine experimental immunosuppression using cyclophosphamide.] Uso da ciclofosfamida em modelo experimental de imunodepressão experimental em ovinos. Pesquisa Veterinária Brasileira 24(3): 115-119. Curso de Medicina Veterinária, Universidade Paulista, Rua Enjolras Vampré 146, São Paulo, SP 04290-070, Brazil. E-mail: mgar@mgar.vet.br
Cyclophosphamide (CY) was used to evaluate the effect on the immune system of sheep. Castred adult rams were divided into 3 groups, with 6 animals each one. Group I (day 0) and Group II (day 1) were treated with CY (40 mg/kg, single dose, IV), and Group III was not treated and remained as control. All groups were immunized on day 0 with B19 brucellosis vaccine. On day 6, all animals were bled and serum agglutination test for brucellosis antibodies detection was performed. During 7 days blood lymphocyte counts and electrophoresis gammaglobulin dosage were daily performed. The results showed statistical decrease of immune response. Low serum titers of brucellosis antibodies were found in Groups I and II, and lymphopenia and hypogammaglobulinemia were also found in these groups. A high mortality rate (40%) occurred in the treated animals.
Abstract in Portuguese:
Garcia M., Sertório S. P., Alves G. J., Chate S. C., Carneiro S. & Lallo M.A. 2004. [Ovine experimental immunosuppression using cyclophosphamide.] Uso da ciclofosfamida em modelo experimental de imunodepressão experimental em ovinos. Pesquisa Veterinária Brasileira 24(3): 115-119. Curso de Medicina Veterinária, Universidade Paulista, Rua Enjolras Vampré 146, São Paulo, SP 04290-070, Brazil. E-mail: mgar@mgar.vet.br
Cyclophosphamide (CY) was used to evaluate the effect on the immune system of sheep. Castred adult rams were divided into 3 groups, with 6 animals each one. Group I (day 0) and Group II (day 1) were treated with CY (40 mg/kg, single dose, IV), and Group III was not treated and remained as control. All groups were immunized on day 0 with B19 brucellosis vaccine. On day 6, all animals were bled and serum agglutination test for brucellosis antibodies detection was performed. During 7 days blood lymphocyte counts and electrophoresis gammaglobulin dosage were daily performed. The results showed statistical decrease of immune response. Low serum titers of brucellosis antibodies were found in Groups I and II, and lymphopenia and hypogammaglobulinemia were also found in these groups. A high mortality rate (40%) occurred in the treated animals.
Abstract in English:
Portiansky E.L., Quiroga M.A., Machuca M.A. & Perfumo C.J. 2004. Mycoplasma suis in naturally infected pigs: an ultrastructural and morphometric study. Pesquisa Veterinária Brasileira 24(1):1-5. Instituto de Patología, Faculdad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata, Calle 60 y 118, C.C. 296, (1900) La Plata, Buenos Aires, Argentina. E-mail: elporti@fcv.unlp.edu.ar
Swine eperythrozoonosis is a haemotrophic disease caused by Eperythrozoon suis, actually called Mycoplasma suis, an extracellular bacterial organism that apparently adheres to pig erythrocyte membrane, inducing its deformation and damage. Since little is known about the ultrastructural and morphometrical aspects of this microorganism, the present work aimed to deal with these issues. The ultrastructural study revealed the presence of structures corresponding to tubules disseminated throughout the soma of M. suis. A variable separation between the microorganism membrane and that of the erythrocyte was also observed. The structural and positional attitude of M. suis could allow speculation about its mechanism of action.
Abstract in Portuguese:
Portiansky E.L., Quiroga M.A., Machuca M.A. & Perfumo C.J. 2004. Mycoplasma suis in naturally infected pigs: an ultrastructural and morphometric study. Pesquisa Veterinária Brasileira 24(1):1-5. Instituto de Patología, Faculdad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata, Calle 60 y 118, C.C. 296, (1900) La Plata, Buenos Aires, Argentina. E-mail: elporti@fcv.unlp.edu.ar
Swine eperythrozoonosis is a haemotrophic disease caused by Eperythrozoon suis, actually called Mycoplasma suis, an extracellular bacterial organism that apparently adheres to pig erythrocyte membrane, inducing its deformation and damage. Since little is known about the ultrastructural and morphometrical aspects of this microorganism, the present work aimed to deal with these issues. The ultrastructural study revealed the presence of structures corresponding to tubules disseminated throughout the soma of M. suis. A variable separation between the microorganism membrane and that of the erythrocyte was also observed. The structural and positional attitude of M. suis could allow speculation about its mechanism of action.
Abstract in English:
ABSTRACT.- Mota, M.A., Campos, A.K. &Araújo, J.V. [Biological control of helminth parasites of animais: Current stage and future outlook. A review.] Controle biológico de helmintos parasitos de animais: estágio atual e perspectivas futuras. Pesquisa Veterinária Brasileira 23(3):93-100. Depto Parasitologia, Universidade Federal de Minas Gerais, Cx. Postal 486, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil.E-mail:mmot@icb.ufmg.br
Biological control is a non-chemical alternative method with its main goal to reduce the amount of parasite population using natural antagonists. The administration of nematophagous fungi to animais has been considered an alternative in gastrointestinal helminthiasis prophylaxis. The nematophagous fungi produce trap-shaped structures, which are responsible for capturing and destroying the free-living stages of nematodes. The genera Arthrobotrys, Duddingtonia and Monacrosporium has been shown efficacy in laboratory and field experiments against cattle, equine, ovine and swine parasites. Severa) fungi formulations have been evaluated, but there is so far no commercial product available. The association of research groups with industry could improve the successful implementation of this control method.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Mota, M.A., Campos, A.K. & Araújo, J.V. [Biological control of helminth parasites of animais: Current stage and future outlook. A review.] Controle biológico de helmintos parasitos de animais: estágio atual e perspectivas futuras. Pesquisa Veterinária Brasileira 23(3):93-100. Depto Parasitologia, Universidade Federal de Minas Gerais, Cx. Postal 486, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil.E-mail:mmot@icb.ufmg.br
O controle biológico é um método desenvolvido para diminuir uma população de parasitas pela utilização de antagonista natural. A administração de fungos nematófagos aos animais domésticos é considerada uma promissora alternativa na profilaxia das helmintíases gastrintestinais parasitárias. Os fungos nematófagos desenvolvem estruturas em forma de armadilhas, responsáveis pela captura e destruição dos estágios infectantes dos nematóides. Os fungos dos gêneros Arthrobotrys, Duddingtonia e Monacrosporium têm demonstrado eficácia em experimentos laboratoriais e no campo no controle de parasitos de bovinos, eqüinos, ovinos e suínos. Diversas formulações fúngicas têm sido avaliadas, no entanto, ainda não há nenhum produto comercial disponível. A associação dos grupos de pesquisa e o envolvimento das indústrias poderão colaborar para o sucesso na implementação desta forma de controle.
Abstract in English:
ABSTRACT.- Mendonça C.L., Vieira D., Kohayagawa A., Schenk M.A.M., Madruga C.R. & Afonso J.A.B. 2003. [Clinical and hematological evaluation of Nelore calves experimentally infected with isolates of Babesia bigemina from the Southeastern, Northeastern and Northern regions of Brazil.] Avaliação clínica e hematológica em bezerros Nelore infectados experimentalmente com isolados de Babesia bigemina das regiões Sudeste, Nordeste e Norte do Brasil. Pesquisa Veterinária Brasileira 23(2):52-60. Clínica de Bovinos, Campus Garanhuns, Univ. Fed. Rural de Pernambuco, Cx. Postal 152, Garanhuns, PE 55292-901, Brazil.
A comparative study was made regarding the clinical and hematological alterations caused by isolates of Babesia bigemina from southeastern, northeastern and northern Brazil in experimentally infected Nelore calves. Eighteen calves between 7 and 9 months of age, without antibodies against Babesia sp and raised free from ticks, were used. Three animais were previously inoculated with 2.0x109 parasitic erythrocytes (PE) for each stabilate. The other 15 calves were subdivided into three groups, with five animais each, that were subinoculated with 1.0x1010 PE of the respective isolates. The clinical and hematological alterations were evaluated by the determination of parasitaemia, haemogram, plasmatic fibrinogen,reticulocyte count, descriptive analysis of the bone marrow and erythrocytic osmotic fragility, for 30 days, totalizing seven moments of observation. The follow-up of the immunological response by the indirect fluorescent antibody test was carried out daily until the 10th day after inoculation (DAI) and after that, on the 151 20th, 25th and 30th DAI. A mild clinical manifestation of the disease was observed. The laboratory findings revealed low leveis of parasitaemia; decrease of the erythrogram values; absence of reticulocytes, initial decrease in the total count of leukocytes, neutrophils and lymphocytes with a posterior elevation of the number of these cells; hypercellularity of the erythrocytic series and decrease of the myeloid: erythroid relation which was more accentuated between the 8th and 12th DAI, and an increase of the erythrocytic osmotic fragility in the groups inoculated with the Southeast and Northeast isolates. None of the three isolates of B. bigemina gave rise to the clinical characteristic form of the disease, although they induced an humoral immune response.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Mendonça C.L., Vieira D., Kohayagawa A., Schenk M.A.M., Madruga C.R. & Afonso J.A.B. 2003. [Clinical and hematological evaluation of Nelore calves experimentally infected with isolates of Babesia bigemina from the Southeastern, Northeastern and Northern regions of Brazil.] Avaliação clínica e hematológica em bezerros Nelore infectados experimentalmente com isolados de Babesia bigemina das regiões Sudeste, Nordeste e Norte do Brasil. Pesquisa Veterinária Brasileira 23(2):52-60. Clínica de Bovinos, Campus Garanhuns, Univ. Fed. Rural de Pernambuco, Cx. Postal 152, Garanhuns, PE 55292-901, Brazil.
O presente trabalho teve por objetivo estudar comparativamente as alterações clínicas e hematológicas desencadeadas por isolados de Babesia bigemina das regiões Sudeste, Nordeste e Norte do Brasil em bezerros Nelore infectados experimentalmente. Foram utilizados 18 bezerros com idade entre sete e nove meses, isentos de anticorpos contra Babesia sp. e criados livres de carrapatos. Três animais foram previamente inoculados com 2,0x109 eritrócitos parasitados (EP) para cada isolado. Os outros 15 bezerros foram subdivididos em três grupos de cinco animais, que foram subinoculados com 1,0x1010 EP dos respectivos isolados. Foram avaliadas as alterações clínicas e hematológica por meio da determinação da parasitemia, do hemograma, do fibrinogênio plasmático, da contagem de reticulócitos, da análise descritiva da medula óssea e da fragilidade osmótica eritrocitária, no decorrer de 30 dias, perfazendo um total de sete momentos de observação. O acompanhamento da resposta imunológica pelo teste de imunofluorescência indireta foi realizado diariamente até o 10º dia pós-inoculação (DPI) e posteriormente no 15º, 20º, 25º e 30º DPI. Clinicamente, observou-se uma manifestação muito branda da doença. Os achados laboratoriais revelaram baixos níveis de parasitemia; decréscimo nos valores do eritrograma; ausência de reticulócitos; diminuição inicial na contagem total dos leucócitos, neutrófilos e linfócitos com posterior elevação do número destas células; hipercelularidade da série eritrocítica e decréscimo da relação mielóide:eritróide mais acentuada entre o 8º e 12º DPI e um aumento da fragilidade osmótica eritrocitária nos grupos inoculados com os isolados sudeste e nordeste. Nenhum dos três isolados de B. bigemina desencadeou a forma clínica característica da enfermidade, apesar de induzirem uma resposta imune humoral.
Abstract in English:
ABSTRACT.- Madruga C.R., Leal C.R.B., Ferreira A.M.T., Araújo F.R., Bonato A.L.V., Kessler R.H., Schenk M.A.M. & Soares C.O. 2002. Genetic and antigenic analysis of Babesia bigemina isolates from five geographical regions of Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 22(4):153- 160. [Análise genética e antigênica de isolados de Babesia bigemina das cinco regiões fisiográficas do Brasil.] Embrapa Gado de Corte, Rodovia BR 262 Km 4, Cx. Postal 154, Campo Grande, MS 79002-970, Brazil.
A molecular epidemiological study was performed with Babesia bigemina isolates from five geographical regions of Brazil. The genetic analysis was done with random amplification of polymorphic DNA (RAPD), repetitive extragenic palindromic elements-polymerase chain reaction (REP-PCR) and enterobacterial repetitive intergenic consensus sequences-polymerase chain reaction (ERIC-PCR) that showed genetic polymorphism between these isolates and generated fingerprinting. In RAPD, IL0872 and IL0876 primers were able to detect at least one fingerprinting for each B. bigemina isolate. The amplification of B. bigemina DNA fragments by REP-PCR and ERIC-PCR gave evidence for the presence in this haemoprotozoan of the sequences described previously in microorganisms of the bacterial kingdom. For the first time it was demonstrated that both techniques can be used for genetic analysis of a protozoan parasite, although the ERIC-PCR was more discriminatory than REP-PCR. Toe dendogram with similarity coeficiente among isolates showed two clusters and one subcluster. The Northeastern and Mid-Westem isolates showed the greatest genetic diversity, while the Southeastem and Southem isolates were the closest. Toe antigenic analysis was done through indirect fluorescent antibodytechnique and Westem blotting using a panei of monoclonal antibodies directed against epitopes on the merozoite membrane surface, rhoptries and membrane of infected erythrocytes. As expected, the merozoite variable surface antigens, major surface antigen (MSA)-1 and MSA-2 showed antigenic diversity. However, B cell epitopes on rhoptries and infected erythrocytes were conserved among all isolates studied. In this study it was possible to identify variable and conserved antigens, which had already been described as potential immunogens. Considering that an attenuated Babesia clone used as immunogen selected populations capable of evading the immunity induced by this vaccine, it is necessary to evaluate more deeply the cross-protection conferred by genetically more distant Brazilian B. bigemina isolates and make an evaluation of the polymorphism degree of variable antigens such as MSA-1 and MSA-2.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Madruga C.R., Leal C.R.B., Ferreira A.M.T., Araújo F.R., Bonato A.L.V., Kessler R.H., Schenk M.A.M. & Soares C.O. 2002. Genetic and antigenic analysis of Babesia bigemina isolates from five geographical regions of Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 22(4):153- 160. [Análise genética e antigênica de isolados de Babesia bigemina das cinco regiões fisiográficas do Brasil.] Embrapa Gado de Corte, Rodovia BR 262 Km 4, Cx. Postal 154, Campo Grande, MS 79002-970, Brazil.
Um estudo de epidemiologia molecular foi executado com isolados de Babesia bigemina das cinco regiões fisiográficas do Brasil. A análise genética foi feita com amplificação aleatória de DNA polimórfico (RAPD), reação da polimerase em cadeia com seqüências de elementos extragênicos repetitivos palindrômicos (REP-PCR) e reação da polimerase em cadeia com seqüências repetitivas enterobacterianas intergênicas de consenso (ERIC-PCR) que apresentaram polimorfismo genético entre os isolados e geraram marcadores. No RAPD com os oligonucleotídeos iniciadores IL0872 e IL0876, foi possível detectar pelo menos um marcador por isolado de B. bigemina. A amplificação de fragmentos de DNA de B. bigemina por REPPCR e ERIC-PCR demonstrou a presença dessas seqüências, descritas anteriormente somente em microrganismos bacterianos, nesse hemoprotozoârio, e, pela primeira vez, foi verificado que podem ser utilizadas para análise genética de um protozoário. O ERIC-PCR foi mais discriminatório que o REP-PCR. O dendograma formado com o coeficiente de similaridade entre os isolados evidenciou dois agrupamentos e um subgrupo. Os isolados do Nordeste e Centro-Oeste demonstraram maior diversidade genética, enquanto que os isolados do Sudeste e Sul foram os mais próximos. A análise antigênica foi executada por meio de imunofluorescência indireta e Western blotting usando um painel de anticorpos monoclonais direcionados a epitopos B na membrana dos merozoítos, roptries e membrana de eritrócitos infectados. Os antígenos variáveis da superfície dos merozoítos, antígeno principal da superfície do merozoíto (APSM)-1 e APSM-2 apresentaram diversidade antigênica. Entretanto, os epítopos de células B nas roptries e nos eritrócitos infectados foram conservados em todos os isolados. Nesse estudo foi possível identificar antígenos variáveis e conservados que anteriormente haviam sido descritos como potenciais imunógenos. Considerando que um clone atenuado de Babesia utilizado para imunização selecionou populações capazes de evadir a resposta imune à vacina, torna-se necessário avaliar mais detalhadamente a imunidade cruzada existente entre os isolados brasileiros mais distantes geneticamente e realizar uma avaliação do grau de polimorfismo dos antígenos variáveis APSM-1 e APSM-2.
Abstract in English:
ABSTRACT.- Schenk M.A.M., Mendonça C.L., Madruga C.R., Kohayagawa A. & Araújo F.R. 2001. [Clinical and laboratorial evaluation of Nellore cattle experimentally infected with Trypanosoma vivax] Avaliação clínico and laboratorial de bovinos nelore infectados experimentalmente com Trypanosoma vivax. Pesquisa Veterinária Brasileira 21(4):157-161. Embrapa Gado de Corte, Cx. Postal 154, Campo Grande, MS 79002-970, Brazil.
In arder to evaluate the clinical-laboratorial alterations, six Neil ore calves were inoculated with 107 Trypanosoma vivax isolated from Poconé region, Mato Grosso, Brazil. The animals were evaluated daily for rectal temperature, packed cell volume (PCV), parasitemia, antibody production, calor of mucous membranes, behavior and appetite. Blood and serum samples for biochemical evaluation for aspartate aminotransferase (AST), alkaline phbsphatase (AF), gamma glutamyltransferase (GGT), cholesterol, urea, creatinine, creatine kinase (CK), calcium, phosphorus and proteinogram were collected on days 4, 8, 12, 16, 23 and 30 post inoculation (DPI). During the following 6 months rectal temperature, PCV and parasitemia were evaluated weekly. T. vivax was evidenced from 1 DPI in all calves and persisted until day 30 in five of six animals. A remarkable decrease (p<0.05) of PCV mean value (25%) was observed on 10 DPI. The animals presented no alterations in their clinical or serum biochemical state during the trial. Seroconversion took place 6 and 8 DPI, and all the animals remained seropositive during the 30 days of experiment. In all the experimental animals the occurrence of T. vivax infection was verified, characterized by the increase of corporal temperature, presente of the blood protozoa and reduction of the globular volume, without altéations in the other variables analyzed. Nellore calves, when experimentally inoculated with T. vivax, are able to establish a balance between host-parasite relationship.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Schenk M.A.M., Mendonça C.L., Madruga C.R., Kohayagawa A. & Araújo F.R. 2001. [Clinical and laboratorial evaluation of Nellore cattle experimentally infected with Trypanosoma vivax] Avaliação clínico and laboratorial de bovinos nelore infectados experimentalmente com Trypanosoma vivax. Pesquisa Veterinária Brasileira 21(4):157-161. Embrapa Gado de Corte, Cx. Postal 154, Campo Grande, MS 79002-970, Brazil.
Avaliaram-se as alterações clínico-laboratoriais de seis bezerros Nelore, de ambos os sexos, inoculados experimentalmente com 107 organismos viáveis de Trypanosoma vivax, isolados de bovinos da região de Poconé, Estado de Mato Grosso. Os animais foram observados diariamente, durante 30 dias, quanto aos parâmetros de temperatura retal, volume globular (VG), parasitemia, produção de anticorpos, coloração de mucosas, comportamento e apetite. Deteminaram-se os níveis séricos de aspartato aminotransferase (AST), fosfatase alcalina (FA), gama glutamiltransferase (GGT), creatina kinase (CK), colesterol, uréia, creatinina, cálcio, fósforo e o perfil eletroforético das proteínas séricas aos 4, 8, 12, 16, 23 e 30 dias pós-inoculação (DPI). Durante os 6 meses seguintes, os animais foram observados semanalmente, avaliando-se a temperatura retal, o VG e a parasitemia. T. vivax foi evidenciado a partir do terceiro e quarto DPI em todos os bezerros e persistiu até o 30º DPI em cinco dos seis animais em estudo. Ocorreu um decréscimo significativo (p<0,05) do valor médio do VG (25%) aos dez DPI. Os animais não apresentaram qualquer alteração no quadro clínico, bem como na avaliação da bioquímica sérica durante o período experimental. A soroconversão ocorreu aos 6 e 8 DPI, permanecendo todos os animais soropositivos nos 30 dias experimentais. Bovinos nelores jovens, infectados experimentalmente com T. vivax, foram capazes de estabelecer um equilíbrio na relação hospedeiro-parasita.
Abstract in English:
ABSTRACT.- Teixeira M.F.B., Esteves, P.A., Schmidt, C.S., Dotta M.A. & Roehe, P.M. 2001. [A monoclonal blocking ELISA for the serological diagnosis of bovine herpesvirus type 1 (BHV-1) infections] ELISA de bloqueio monoclonal para o diagnóstico sorológico de infecções pelo herpesvírus bovino tipo 1 (BHV-1). Pesquisei Veterinária Brasileira 21(1):33-37. Centro de Pesquisá Veterinária Desidério Finamor (CPVDF), FEPAGRO, Cx. Postal 2076, Porto Alegre, RS 90001-970, Brazil.
A monoclonal antibody-based blocking enzyme linked immunosorbent assay (ELISA-M) was developed and standardized for the detection of antibodies to irífectious bovine rhinotracheitis virus (Bovine Herpesvirus type 1; BHV-1). A total of 266 samples of bovine sera (148 negative and 118 positive) were tested and compared with the results of a standard sérum neutralization (SN) test. The ELISA-M was adjusted to 92.37% sensitivity, 92.56% especificity, 93.83% negative predictive value, 90.83% positive predictive value and to na accuracy of 92.48%, with an agreement index (k) equal to 0.85. The main advantages presented by the ELISA-M were its practicality and rapidity in performance. This test was shown to be a suitable alternative to SN tests in the detection of BHV-1 antibodies in cattle. However, the ELISA was unable to discriminate between BHV-1 and bovine herpesvirus type 5 (BHV-5) antibodies.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Teixeira M.F.B., Esteves, P.A., Schmidt, C.S., Dotta M.A. & Roehe, P.M. 2001. [A monoclonal blocking ELISA for the serological diagnosis of bovine herpesvirus type 1 (BHV-1) infections] ELISA de bloqueio monoclonal para o diagnóstico sorológico de infecções pelo herpesvírus bovino tipo 1 (BHV-1). Pesquisei Veterinária Brasileira 21(1):33-37. Centro de Pesquisá Veterinária Desidério Finamor (CPVDF), FEPAGRO, Cx. Postal 2076, Porto Alegre, RS 90001-970, Brazil.
Um ensaio imunoenzimático do tipo ELISA de bloqueio com anticorpo monoclonal (ELISA-M) foi desenvolvido e padronizado para a detecção de anticorpos contra o vírus da Rinotraqueíte Infecciosa Bovina (Herpesvírus Bovino tipo 1; BHV-1). Foram utilizadas nesta avaliação 266 amostras de soros bovinos, sendo 148 negativos e 118 positivos em testes de soroneutralização (SN). Em comparação com este último, o ELISA-M demonstrou uma sensibilidade de 92,37%, especificidade de 92,56%, valor preditivo positivo de 90,83%, valor preditivo negativo de 93,83% e precisão de 92,48%. O índice de concordância (k) entre os testes foi de 0,85. O ELISA-M apresentou como vantagens a rapidez e a praticidade de execução. Com base nestes resultados, o ELISA-M foi considerado uma alternativa apropriada para o diagnóstico sorológico de infecções pelo BHV-1. Entretanto, o teste não foi capaz de diferenciar anticorpos induzidos por BHV-1 ou BHV-5.
Abstract in English:
ABSTRACT.- Madruga C.R., Kessler R.H., Schenk M.A.M. & Miguita M. 2000. A conglutination test for a rapid detection of antibodies against Babesia bigemina. [Teste de conglutinação rápida para detecção de anticorpos contra Babesia bigemina.] Pesquisa Veterinária Brasileira 20(4):161-166. Embrapa Gado de Corte, Rodovia BR 262, Km 4, Cx. Postal 154, Campo Grande, MS 79002-970, Brazil.
A rapid conglutination test (RCT) with performance comparable to the indirect fluorescent antibody technique (IFAT) was developed to detect antibodies against Babesia bigemina (B. bigemina-RCT). The B. bigemina-RCT is a sensitive, specific, economical, and rapidly performed serological test suitable for field application or minimally equipped laboratories. This test had a sensitivity of 90.9%, and specificity of 97.6%, compared to IFAT, which showed for the sarne parameters respectively, 98.3% and 99.7%. The early detection of anti- B. bigemina immunoglobulins by RCT in experimental infections was nearly parallel to that of IFAT. Cross reactions were observed with sera from calves experimentally infected with Babesia bovis (1.8%) and with Anaplasma marginale (1.2%). RCT antigen prepared with non parasitized erythrocytes (negative antigen) showed 1.5%, 3.5% and 2.2% of positive reactions with sera from animals experimentally infected with B. bigemina, B. bovis and A. marginale. However, none of the sera from animals of endemic areas for babesia infection resulted in positive reactions with the negative antigen. Considering these results and shelf life over six months, the B. bigemina-RCT could be used for epidemiological surveys and evaluation of control measures against this species of Babesia.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Madruga C.R., Kessler R.H., Schenk M.A.M. & Miguita M. 2000. A conglutination test for a rapid detection of antibodies against Babesia bigemina. [Teste de conglutinação rápida para detecção de anticorpos contra Babesia bigemina.] Pesquisa Veterinária Brasileira 20(4):161-166. Embrapa Gado de Corte, Rodovia BR 262, Km 4, Cx. Postal 154, Campo Grande, MS 79002-970, Brazil.
Um teste rápido de conglutinação (TCR) com desempenho comparável a imunofloorencência indireta (IFI) foi desenvolvido para detectar anticorpos contra Babesia bigemina. O TCR:-B.bigemina é um teste sorológico sensível, econômico e executável rapidamente; apropriado para condições de campo ou laboratórios com estrutura mínima. Este teste tem uma sensibilidade de 90,9% e especificidade de 97,6%, enquanto que a IFI apresentou para os mesmos parâmetros, respectivamente, 98,3% e 99,7%. Nas infecções experimentais a detecção de imunoglobulinas anti-B. bigemina pelo TCR foi aproximadamente a mesma da IFI. As reações cruzadas verificadas nos soros de bezerros experimentalmente infectados com Babesia bovis e Anaplasma marginale foram 1,8% e 1,2%, respectivamente. O antígeno preparado com eritrócitos não parasitados (antígeno negativo) apresentou 1,5%, 3,5% e 2,2% de reações positivas com os soros de animais infectados corri ·B. bigemina, B. bovis e A. marginale. Entretanto, nenhum dos soros dos animais de áreas endêmicas para infecção de babésia resultaram ern reações positivas com o antígeno negativo. Consideraodo,estes resultados e o período de viabilidade do antígeno de TCR, acima de seis meses, possibilita o TCR-B. bigemina ser utilizado em levantamentos epidemiológicos e na avaliação das medidas de controle contra esta espécie de Babesia.
Abstract in English:
ABSTRACT.- Brito M.A.V.P., Brito J.R.F., Souza H.M. & Vargas O.L. 1998. [Evaluation of the sensitivity of bulk tank milk cultures for the isolation of contagious bovine mastitis pathogens.] Avaliação da sensibilidade da cultura de leite do tanque para isolamento de agentes contagiosos da mastite bovina. Pesquisa Veterinária Brasileira 18(1):39-44. Embrapa-Centro Nacional de Pesquisa de Gado de Leite, Juiz de Fora, MG 36038-330, Brazil.
Samples of bulk tank milk from 33 herds were collected at the dairy processing plant and cultured, as a means of detecting specific (contagious) bovine mastitis pathogens. Somatic cell counts (SCC) were made on a Fossomatic 90. Two and three weekly consecutive samples were obtained from 13 and 12 herds, respectively. Only one sample was examined from eight herds. Three daily consecutive samples of bulk milk and individual quarter samples from all lactating cows from four herds (A, B, C and D) were also examined. Milk from individual quarters were cultured on blood agar while tank milk samples were cultured on TKT, Mannitol Salt, MacConkey agars and Sabouraud containing chloramphenicol. Staphylococcus aureus was recovered from 26 of the 33 herds sampled in the dairy processing plant. Nine of these samples also contained Streptococcus agalactiae. Nine herds had SCC above 500,000 ml1 The remaining 23 herds had SCC levels below 400,000 ml1 S. aureus and S. agalactiae were isolated from five of the nine herds with high SCC, S. agalactiae from one and S. aureus from three. Six herds had SSC below 200,000 ml1 S. aureus and S. agalactiae were isolated from one, S. aureus from three, while the other two were negative for both pathogens. The results of herds A, B, C and D sampled at the farms showed that S. aureus was isolated from 1.8%, 19.2%, 17.0% and 8.4% of the animals and 0.9%, 5.9%, 5.4% and 2.2% of the mammary quarters, respectively. S. agalactiae was isolated from herds A, C and D. Within these herds the percentages of isolation were, respectively, 1.8%, 10.6% and 8.4% for the cows and 0.46%, 3.8% and 3.7% for the mammary quarters. S. aureus was recovered from all three bulk tank cultures from herds A, B and D. Only the third sample from herd C was positive for S. aureus. S. agalactiae was recovered from all samples collected from herd D, two samples from herd C and one sample from herd A. Coliforms were isolated from all tank samples from herds A, B, C and D and from all but one sample collected in the processing plant. Yeasts were recovered from 16 herds sampled at the processing plant and from all tank samples from herds A, B, C, and D. Neither coliforms or yeasts were isolated from the individual animals of herds A, B, C and D. These findings indicate that the milk was contaminated during or after milking, probably due to deficient hygiene and cleaning procedures. The analysis of the bulk tank milk cultures showed that the test was sensitive enough to detect contagious mastitis pathogens. The sensitivity of the test increased when more than two consecutive samples were examined.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Brito M.A.V.P., Brito J.R.F., Souza H.M. & Vargas O.L. 1998. [Evaluation of the sensitivity of bulk tank milk cultures for the isolation of contagious bovine mastitis pathogens.] Avaliação da sensibilidade da cultura de leite do tanque para isolamento de agentes contagiosos da mastite bovina. Pesquisa Veterinária Brasileira 18(1):39-44. Embrapa-Centro Nacional de Pesquisa de Gado de Leite, Juiz de Fora, MG 36038-330, Brazil.
Amostras de leite total (leite do tanque) de 33 rebanhos foram coletadas na plataforma de recepção da indústria laticinista e cultivadas para detectar patógenos específicos (contagiosos) da mastite. Foi feita a contagem de células somáticas (CCS) das amostras utilizando o equipamento Fossomatic 90. Em 13 e 12 rebanhos avaliaram-se duas e três amostras semanais consecutivas, respectivamente, e em oito avaliou-se apenas uma. Foram também examinadas três amostras diárias consecutivas do leite do tanque e amostras dos quartos mamários individuais, coletadas na própria fazenda, de todas as vacas em lactação de quatro rebanhos (A, B, C e D). As amostras de leite dos quartos mamários individuais foram cultivadas em ágar sangue e as amostras do tanque, em placas de TKT, Sal Manitol, MacConkey e Sabouraud contendo cloranfenicol. Dos 33 rebanhos cujas amostras foram obtidas na plataforma de recepção da indústria, isolou-se Staphylococcus aureus de 26, nove desses em associação com Streptococcus agalactiae e em três rebanhos isolou-se somente S. agalactiae. Nove rebanhos tiveram CCS acima de 500.000 ml1 e 21, abaixo de 400.000 ml1 Em cinco dos nove rebanhos com CCS acima de 500.000 m1-1 foram isolados S. aureus e S. agalactiae, em três, apenas S. aureus e em um, apenas S. agalactiae. Seis rebanhos apresentaram CCS abaixo de 200.000 ml·1; de um deles foram isolados S. aureus e S. agalactiae, de três, S. aureus e os outros dois foram negativos para estes dois patógenos. Os resultados encontrados nos quatro rebanhos cujas amostras foram coletadas na própria fazenda mostraram que S. aureus foi isolado nas seguintes porcentagens dos animais: 1,8%, 19,2%, 17,0% e 8,4% e dos quartos mamários: 0,9%, 5,9%, 5,4% e 2,2%, respectivamente, para os rebanhos A, B, C e D. S. agalactiae foi isolado dos rebanhos A, C e D. Nestes três rebanhos, as porcentagens de isolamento foram, respectivamente, 1,8%, 10,6% e 8,4% para as vacas e 0,46%, 3,8% e 3,7% para os quartos mamários. S. aureus foi isolado de todas três amostras do tanque dos rebanhos A, B e D. Somente a terceira amostra do rebanho C foi positiva para S. aureus. S agalactiae foi recuperado de todas as amostras do rebanho D, duas do rebanho C e de uma do rebanho A. Todas as amostras do tanque dos rebanhos A, B, C e D apresentaram contaminação com coliformes e somente uma das amostras coletadas na plataforma de recepção da indústria foi negativa para coliformes. Leveduras foram isoladas de 16 amostras coletadas na indústria e de todas amostras do tanque dos rebanhos A, B, C e D. Não foram isolados coliformes ou leveduras dos quartos mamários dos animais destes rebanhos, sugerindo que ocorreu contaminação do leite durante ou após a ordenha, provavelmente devido a deficiências nos processos de limpeza e higienização. A análise dos resultados das culturas do leite do tanque mostrou que o exame foi específico para detectar os patógenos contagiosos da mastite. A sensibilidade do teste aumentou quando se examinaram mais de duas amostras consecutivas.
Abstract in English:
The California Mastitis Test (CMT) is a simple and widely used diagnostic tool for subclinical mastitis. lt is used even in areas where laboratory facilities are available for diagnosis and monitoring program purposes. CMT usually score 1-5, where 1 indicates a completely negative reaction and 2-5 increasing degrees of inflammatory reaction of the udder. The reactions 2-5, 3-5 or 4-5 may be considered as indicative of subclinical mastitis, because they are related to an increase of the somatic cell count (SCC) in the milk. This variation, however, may produce either false-positive or false-negative results. The aim of this study was to assess the sensitivity and specificity of the CMT in comparison with SCC. A total of 3,012 quarter milk samples from 760 lactating cows were examined. CMT was evaluated at the moment of sampling at cow side and SCC in the laboratory, with a fluoro-opto-electronic method (Fossomatic 90). The average CCS (x 1,000 cells/ml) for CMT scores were: 1 (79.9), 2 (333.5), 3 (670.3), 4 (1,354.0) and 5 (4,455.6). Three options for CMT interpretation were evaluated in relation to a range of CCS, starting from 100,000 cells/ml: (a) 1 versus 2, 3, 4, and 5; (b) 1 and 2 versus 3, 4 and 5; and (e) 1, 2 and 3 versus 4 and 5. The sensitivities of CMT scoring to detect quarters with SCC >200,000/ml were 79%, 61% e 34%for options a, b ande, respectively. The sensitivities of CMT scores for SCC >500,000/ml for options a, b ande, were, respectively, 93%, 82% e 54%. The sensitivity of CMT scores to identify subclinical mastitis was satisfactory (above 80%) when options b ande were used. The interpretation of CMT score 3 as negative for subclinical mastitis was considered as adequate (sensitivity around 80%) only when CCS ranged between 1,200,000 and 1,400,000 cells/ml. The specificities of CMT scoring for CCS of 200,000 and 500,000 were, respectively, 90% and 80% (option a), 97% and 90% (option b) and 99% and 97% (option e).
Abstract in Portuguese:
O "California Mastitis Test" (CMT) estima o conteúdo de células somáticas no leite e é interpretado subjetivamente, estabelecendo-se escores que, na maioria dos casos, variam de 1 a 5. O escore 1 indica uma reação completamente negativa e os de 2-5 indicam graus crescentes de resposta inflamatória do úbere, sendo normalmente considerados como indicativos de mastite subclínica. Dependendo da interpretação dos escores, o CMT pode produzir resultados falso-positivos ou falso-negativos. Esse trabalho teve o objetivo de avaliar a sensibilidade e a especificidade do CMT em relação à contagem de células somáticas (CCS). Foram utilizadas 3.012 amostras de leite provenientes de 760 vacas Holandesas ou mestiças Holandês-Zebu, pertencentes a 15 rebanhos. Todas as amostras foram submetidas ao CMT e processadas para CCS em equipamento Fossomatic 90. Os valores médios de CCS (x 1.000 células/mi) obtidos para os escores de CMT foram 1 (79,9), 2 (333,5), 3 (670,3), 4 (1.354,0) e 5 (4.455,6). Três opções de interpretação (doente/não-doente) para o CMT foram testadas, em relação aos valores de CCS, iniciando com 100.000 células/ml: (a) 1 versus 2, 3, 4, e 5; (b) 1 e 2 versus 3, 4 e 5; (c) 1, 2, 3 versus 4 e 5. As sensibilidades do CMT em identificar corretamente quartos mamários acima de 200.000 células/mi foram 79%, 61% e 34%, para as opções a, b e e, respectivamente. Para identificar corretamente contagens acima de 500.000 células/mi, as sensibilidades do CMT, para as opções a, b e e, foram, respectivamente: 93%, 82% e 54%. A sensibilidade do CMT em identificar quartos mamários com mastite subclínica foi adequada (acima de 80%) quando a interpretação do teste foi mais rigorosa (opções a e b). A interpretação da reação 3 como negativa (opção e) só alcançou sensibilidade de 80% para contagens entre 1.200.000 e 1.400.000 células/mi. As especificidades do CMT, para CCS de 200.000 e 500.000 foram, respectivamente, 90% e 80% (opção a), 97% e 90% (opção b) e 99% e 97% (opção e).